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利用HyQSphere微载体的取样技术

发布作者:拂晓玻璃容器  发布日期:2013-8-18  点击次数:1732

1.将培养容器从培养箱转移到生物安全柜中,将容器放置在转速设定为60 rpm的搅拌板上。

2.使培养物处于搅拌状态,打开转瓶一个侧臂的盖子。按下取样按钮的同时,将Finnpipette移液器(或同等移液器)的长吸头深入到培养物的中部,但不要碰到转子,然后将取样按钮松开,让培养物样品快速吸入到移液器吸头中。将样品转移至15mL锥形管中。注意:微载体球珠占了从培养物中取出的样品体积的一部分。

3.900rpm离心样品5-10分钟。要得到精确度和体积参考,将从样品中取出的培养基转移到量筒中,记录体积。(例如,从10 mL样品中取出9.5 mL培养基,则留下0.5 mL微载体。)去除液体。

4.在管中加入5 mL Thermo Scientific HyClone Dulbecco’s磷酸盐缓冲液(DPBS)(SH30028)清洗微载体两次,去除上清之前震荡几次。两次清洗之间离心5-10分钟,形成微载体沉淀之后去除液体。注意:此步可在室温下操作,无需精确体积。

5.要将细胞与微载体分离,向盛有清洗过的细胞-微载体的管中加入正确已知体积(见步骤3参考体积)的胰蛋白酶或HyQTase非哺乳动物细胞分离试剂(0.05%-0.25%),在所需温度下放置10分钟左右。用Finnpipette移液器,温和地将样品吸入吸头中再打出,反复吹吸几次以得到单细胞悬液。

6.样品可以用来计数或者进行下一步操作。也可以进行细胞核计数。注意:据文献记录,微载体聚集物会使细胞计数产生偏差,导致样品难以准确测量。利用HyQSphere微载体从大体系中收集细胞此方法适用于HyQSphere FACT 102L, CGEN 102L, Pro-F 102L, P Plus 102L和P 102L微载体。

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