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生物实验中常用生化试剂作用

发布作者:拂晓玻璃容器  发布日期:2013-10-14  点击次数:1783
1.蛋白酶K:
能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白。再尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml,推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2.SDS:
十二烷基硫酸钠. 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀
3.IPTG
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等. IPTG和乳糖的结构相似,所以它和乳糖一样,可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白的空间构像变化,四聚体解聚成单体,失去与操纵子特异性结合的能力,从而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定
4.X-gal
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的显色试剂,在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5.G418:
一种抗生素,对几乎所有的细胞都有毒性,是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6.DMSO
二甲基亚砜.实验室常用于作液体层析溶剂,同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物.能溶于所有烷烃和烯烃。
7.曲拉通X-100
TritonX-100.用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用. 能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40
8.NP-40
很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
9、BSA
牛血清白蛋白. 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。
10.甲酰胺
甲酰胺被用作凝胶电泳中RNA的稳定剂,也用于稳定毛细管电泳中的变性单股DNA。
11.TEMED
四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性pH条件下,加入TEMED可加速凝胶聚合
12.巯基乙醇
一种强还原剂。可还原蛋白二硫键,从而使蛋白保持溶解状态,有利于与SDS的结合。使蛋白解离成单个亚基。
13.甲叉双丙烯酰胺
N,N'-甲叉双丙烯酰胺,别名MBA,又叫亚甲基双丙烯酰胺,次甲基双丙烯酰胺,N,N'-甲撑双丙烯酰胺。作交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。
14.过硫酸铵
过硫酸铵(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝剂TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。
15.B27
一种添加剂,用于神经肝细胞培养,被认为具有抑制胶质细胞生长的作用。
16.DTT
二硫苏糖醇,常用还原剂,既有抗氧化作用。它能保护酶分子上的还原性基团,维持还原性环境,稳定酶的活性。又是一种蛋白质变性剂,破坏二硫键,浓度不同,起到的作用也不同。
17.弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂
弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液,含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放,并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用,不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免
氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液,能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分,可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放,并刺激局部免疫反应。
18.吐温 20
Tween-20 ,常用的非离子去垢剂。
19.吐温 80
Tweenum 80 ,除作乳化剂外,也用作某些水中难溶药物的增溶剂。
20. 十二烷基肌氨酸钠 脱细胞试剂,制备脱细胞组织工程支架材料
21.PVPP
PVPP对片剂具有崩解作用,能和各种不溶于水的药物共容,能稳定化各种悬浮剂,又具有形成络合物的能力以及吸附作用等,因而可用作医药助剂。也用于除去啤酒中的多酚。
22.PIPES
,实验室做缓冲剂用。全名是哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸),pKa是6.80。不参与也不干扰生物化学反应,价格比较贵。常用在免疫和细胞类的实验中,PIPES有时还被用来制备大肠杆菌感受态。
23.CTAB
十六烷基三乙基溴化铵,一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白,多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA,而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。CTAB法是现在实验室最常用的一种提取核酸的手段。
24。HEPES
羟乙基哌秦乙硫磺酸,一种弱酸缓冲剂,主要作用是防止培养基pH迅速变化。在开放式培养条件下,培养基脱离了5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES
25.MOPS
一种缓冲液,有抑制RNA酶的作用,一般和甲醛(用于变形RNA)用于RNA变性电泳
26。盐酸胍
盐酸胍等可使蛋白质结构中的氢键发生断裂,这增加了非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度,减少了疏水相互作用。
27。PMSF
Phenylmethanesulfonyl fluoride,中文名为苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节 为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
28.溴酚蓝
pH指示剂,pH=3.0时呈黄色,pH=4.6时呈蓝紫色。酸碱指示剂;非水滴定用指示剂,蛋白电泳染色;病毒化验等。
29。台盼兰
台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰,是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性
30。二甲苯青FF
用于琼脂糖聚丙烯酰胺凝胶电泳的示踪染料, 易溶于水和醇,可与溴芬蓝按照一定比例配置loading buffer
31。吖啶橙
是一种荧光色素,与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光,与DNA结合量少发绿色荧光,与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染,因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间,这样在DNA复制过程中,会使DNA链增加或缺失一个碱基,造成移码突变。吖啶橙染液有毒,操作时要戴手套,需避光。
32。EDTA和EGTA
EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合剂的代表性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性络合物。此外EDTA也可用来使有害放射性金属从人体中迅速排泄起到解毒作用。也是水的处理剂。EGTA--乙二醇双(2-氨基乙基)四乙酸在.Mg2+存在下测定Ca2+时,可用EGTA直接滴定,滴定误差小于0.3% ,比用EDTA滴定提高了选择性..此外它与金属离子形成的配合物的稳定性普遍比相应的EDTA配合物差。
33.TRICINE
N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸, 常见的电泳系统是Tris-甘氨酸系统;Tris-Tricine电泳则用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的电泳,能够获得较好的分离效果. 可以用前者代替。
34、PVP40
PVP40 中的CO - N = 有很强的结合酚类化合物的能力, 与其形成稳定的复合物, 常用于提取RNA时除去酚类。
35、脱氧胆酸钠
离子型去垢剂,作用有:1、
裂解细胞;2、
溶解蛋白,尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白,如膜蛋白等;3、很适合做WB,但在Co-IP中使用,需要谨慎
36、6-BA
细胞培养中用到,细胞分裂素。
37、碘代乙酰胺
也叫作碘乙酰胺,2-碘乙酰胺. 用于有机合成,在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂,用于多肽测序以及酶抑制剂等,蛋白组学级试剂
38、萘乙酸
NAA,为广谱性植物生长调节剂,可促进细胞分裂,诱导形成不定根,改变雌雄花比例,增加坐果率等
39、番红O
藏红T;
氧化还原指示剂;生物染色;酸碱指示剂;滴定分析亚硝酸盐。
40、TTC
2,3,5-三苯基氯化四氮唑(红四氮唑),多用于药物分析和琼脂糖添加剂,在计数琼脂中加入适量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML琼脂中),细菌菌落长成红颜色,,对去除食品本底颗粒物干扰非常有意义。
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